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看似「矛盾」的「ANA 阴性、ds

自身免疫病相关抗体检测平台,是实验室提供多种自身抗体检测平台,包括:IIFA、ELISA、免疫印迹法、放免法等。

针对同一种或同一类自身抗体,存在一种以上的检测方法,根据方法灵敏度和特异性的差异,在出现阳性或可疑结果时,可通过不同的方法进行佐证,以期为临床诊断提供可靠结果。

相信大多数从事自身免疫病抗体实验室检测的同仁,在日常工作中,会遇到各种让人纠结的问题。其中之一便是「ANA(IIFA,间接免疫荧光法)阴性,ds-DNA(ELISA 或免疫印迹法)阳性」,碰到这样的情况,在实验室内部该怎样处理?与临床医生进行沟通时又该如何解释?

「ANA(IIFA,间接免疫荧光法)阴性,ds-DNA(ELISA 或免疫印迹法)阳性。」这种初筛检测结果,并不少见。可能的原因有以下几点:

1. 以 HEp-2 为基质的 ANA IIF 法,在 2014 年 Annals of the Rheumatic Diseases 中专家共识中指出其为「SARD(系统性自身免疫性风湿病)实验室诊断的推荐初筛检测方法」。该方法灵敏度高,这与 HEp-2 细胞的特性相关:约含 100 中以上不同靶点自身抗原;有些自身抗体无需进一步确认实验即可明确(如抗着丝点抗体);非常有利于多种自身抗体共存的自免病的诊断;可用于发现新的自身抗体。

但同时,其缺点也不容忽视:判断结果存在主观性;难以进行标准化;判读需要培训和专业知识;对一些特定自身抗体敏感度低(如抗 Jo-1 抗体、抗核糖体 P 蛋白抗体、抗 SS-A/Ro60 抗体、抗 Ro52/TRIM21 抗体),这些抗体可溶性较强,在制备基质片的过程中容易丢失;特异性低(有较高的假阳性率)。

2. 抗 ds-DNA 特异性抗体分为高亲和力抗体和低亲和力抗体,高亲和力抗 ds-DNA 抗体对 SLE 诊断有更高的特异性,低亲和力抗 ds-DNA 抗体的特异性不高,在其它风湿免疫性疾病中也会出现。

其常规检测方法有:a. IIFA,包括绿蝇短膜虫法(CLIIF)和马疫锥虫法(TEIIF);b. ELISA 法;c. Farr 法(放免法);d. DIGFA(金标法);e. 印迹法。

目前国内临床实验室常用方法为 CLIIF、ELISA、印迹法。其中 ELISA 法的包被抗原一般为人工纯化的 ds-DNA 抗原,抗原在包被过程中,容易造成部分 DNA 内部微店变性解链成单链 DNA,会出现假阳性结果,该方法灵敏度较高,更适用于检测低亲和力抗体;CLIIF 法包被抗原中 ds-DNA 天然、纯净、干扰因素少,特异性较高,较适用于检测高亲和力抗体。印迹法在灵敏度和特异性方面都不如前两者,但操作简单,对技术和经验要求不高。

鉴于以上原因,出现这种看似「矛盾」的结果,作为实验室工作人员,我们该如何进一步做确证实验和与临床医生进行沟通?

以下流程图仅供参考,欢迎各位同仁踊跃讨论:

本文作者:石楠,山东济南迪安医院检验中心

图片:Shutterstock.com

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